? ? ? ?可以說(shuō)，色譜柱是色譜分析過(guò)程中最重要的部分，相當(dāng)于人體的“心臟”。根據(jù)自己要分析的樣品去選擇合適的液相色譜柱，需要考慮不同參數(shù)將會(huì)造成什么影響，比如粒徑、酸堿性、極性和分子量大小等。即使是液相色譜柱也分很多類型，比如正相、反相、C18柱、親水性色譜柱等等。只有了解影響分析柱性能的因素，才能結(jié)合目標(biāo)分析物的性質(zhì)、需要達(dá)到的分析效果及實(shí)驗(yàn)室條件來(lái)選擇適合的色譜柱。
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? ? ? ? 在設(shè)定選擇樣品分析的HPLC方法時(shí)，首先需要根據(jù)化合物的分子量大小，極性大小等因素選擇合適的分離模式，在適當(dāng)?shù)姆蛛x模式下去選擇合適的色譜柱及流動(dòng)相。在很多色譜分析中涉及的化合物樣品絕大部分都可以使用反相分離模式，恒譜生有許多可用于反相分離的液相分析柱，比如USHA C18、 USHA C8、 USHA C4、 USHA苯基柱、USHA氰基柱等。
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? ? ? ? 影響反相鍵合相色譜柱性能的因素有哪些呢？
? ? ? ? 一、硅膠純度
? ? ? ? 硅膠純度對(duì)峰形有很大液相，硅膠雜質(zhì)和殘留的金屬離子會(huì)影響樣品的峰形，如果硅膠表面的金屬含量高會(huì)影響堿性化合物的峰形，易發(fā)生拖尾。恒譜生USHA C18色譜柱以全覆蓋的鍵合硅膠為填料，具有優(yōu)異的穩(wěn)定性、重復(fù)性、高選擇性和高分離度等特點(diǎn)。
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? ? ? ? 二、顆粒形狀及粒徑
? ? ? ? 球形顆粒柱效高、重現(xiàn)性好、柱床結(jié)構(gòu)均勻；不規(guī)則的顆粒柱床結(jié)構(gòu)不均勻、流動(dòng)相線速度不均勻，容易形成譜帶展寬；平均顆粒直徑，粒徑越小，柱效越高，柱壓也越高。粒徑分布越廣則柱效越低，壓力越大。恒譜生色譜填料均采用球形形狀，列如USHB Sil色譜柱采用高純度球形硅膠，金屬雜質(zhì)＜10ppm，具有柱效高和峰形好等特點(diǎn)，可用于分離極性和堿性的有機(jī)化合物。
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? ? ? ? 三、顆粒表面積
? ? ? ? 相對(duì)而言，高表面積對(duì)樣品具有較強(qiáng)的保留能力，更大的柱容量和分離度。而低表面積能更快達(dá)到平衡狀態(tài)，更適合梯度洗脫程序。
? ? ? ? 除了以上這些因素，還有諸如鍵合類型及鍵合相、碳覆蓋率等因素影響。單體鍵合方式可以提高傳質(zhì)速率，縮短柱平衡時(shí)間；聚合體鍵合方式可以增加色譜柱穩(wěn)定性，增加載樣量。鍵合相的不同會(huì)直接影響化合物的保留行為。而高碳覆蓋率可以提高分辨率和重現(xiàn)性，但分析時(shí)間長(zhǎng)。
發(fā)布于: 2021-07-02